上海起發(fā)jembio T4 DNA聚合酶說(shuō)明書(shū)

T4 DNA聚合酶 來(lái)源：大腸桿菌噬菌體T4描述：• 表現(xiàn)出5'->3' 聚合酶和3'->5' 核酸外切酶活性(1, 2)。• 將標(biāo)記的核苷酸添加到 DNA 片段的凹陷 3' 末端。• 聚合酶需要存在單鏈 DNA 模板和引物。• 核酸外切酶比 DNA 聚合酶 I 中的更強(qiáng)，對(duì)單鏈 DNA 的活性高于對(duì)雙鏈 DNA 的活性。• 超純重組酶。• 核酸外切酶活性可用于從雙鏈 DNA 的 3' 端去除一個(gè)或幾個(gè)核苷酸。• 酶適用于：o 去除 3' 突出端以形成平端 (3,4)o 5' 填充以形成平端 (3,4)o 使用替代合成進(jìn)行探針標(biāo)記 (3,4)o 單鏈缺失亞克隆 (5)o 定點(diǎn)誘變中的第二鏈合成 (6)單位定義：一個(gè)單位是在 37oC 下 30 分鐘內(nèi)催化 10 nmoles 總核苷酸摻入酸不溶性產(chǎn)物的酶量。儲(chǔ)存條件：儲(chǔ)存于 –20oC。儲(chǔ)存緩沖液：20 mM 磷酸鉀 (pH 6.5)、5 mM 二硫蘇糖醇和 50% (v/v) 甘油。測(cè)定條件：67 mM Tris-HCl（22oC 時(shí) pH 8.8）、6.7 mM MgCl2、10 mM 二硫蘇糖醇、16.6 mM 硫酸銨、6.7 µM EDTA、20 µg 牛血清白蛋白、45 µg 活化小牛胸腺 DNA 和 0.033 mM dCTP 、dGTP、dTTP 和 [a-32P]dATP。在 100 µl (1) 的反應(yīng)體積中，在 37oC 下孵育 30 分鐘。質(zhì)量控制：所有制劑都經(jīng)過(guò)了污染核酸內(nèi)切酶活性測(cè)試。參考：1. Goulian, M.、Lucas, ZJ 和 Kornberg, A. (1968) J. Biol。化學(xué)。243、627-638。2. Lehman, IR (1981) Enzymes 14, 51-65。3. Tabor, S. and Struhl, K (1989) in Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel, FM, et al., eds) pp. 3.5.10-3.5.12, John Wiley&Sons, New York。4. Sambrook, J.、Fritsch, EF 和 Maniatis, T. (1989) 分子克隆：實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)，第二版，第 5.44-5.47 頁(yè)，冷泉港。5. Dale, R.、McClure, B. 和 Houchins, J., (1985) Plasmid 13, 31-40。6. Kunkel, TA, Roberts, JD 和 Zakour, RA (1987) Methods Enzymol.154, 367-382。 T4 DNA 聚合酶是嗜中性聚合酶，表現(xiàn)出非常強(qiáng)的 3'->5' 核酸外切酶活性。